我們在使用流式細(xì)胞儀檢測外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)時(shí)，是不是常會發(fā)現(xiàn)CD3+T細(xì)胞的比例稍高與CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的比例之和？這是因?yàn)樵贑D3+T細(xì)胞中，不僅含有CD4+CD8-T細(xì)胞和CD4-CD8+T細(xì)胞，還含有少量的CD4+CD8+T細(xì)胞和CD4-CD8-T細(xì)胞，如圖一。
圖1 PBMC流式分析
那么，我們現(xiàn)在先來認(rèn)識一下CD3+CD4-CD8- T細(xì)胞到底是什么細(xì)胞？
CD3+CD4-CD8- T細(xì)胞主要有兩類：一類是CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞（Double negative T cell，DNT細(xì)胞），另一類是γδ T細(xì)胞。這兩類T細(xì)胞的共同特點(diǎn)是都不表達(dá)CD4與CD8（少數(shù)位于腸道的γδ T細(xì)胞可能表達(dá)CD8α）；不同點(diǎn)在于細(xì)胞表面的TCR不同，DNT細(xì)胞的TCR是由α和β兩條肽鏈組成的，而γδ T細(xì)胞的TCR是由γ和δ兩條肽鏈組成的，如圖2。因此，DNT細(xì)胞的表型是TCRαβ+CD3+CD4-CD8-，而γδ T細(xì)胞的表型則是TCRγδ+CD3+CD4-CD8-。
圖2 T細(xì)胞分化發(fā)育過程（圖來源網(wǎng)絡(luò)）
（1）DNT細(xì)胞屬于T細(xì)胞的一種亞型，在正常人體內(nèi)，DNT細(xì)胞數(shù)量極少，僅占外周T淋巴細(xì)胞的1%-2%。對于DNT細(xì)胞的起源，研究雖多，卻未有定論。根據(jù)研究成果，總結(jié)出DNT細(xì)胞的來源包括：
①DNT細(xì)胞可以通過胸腺內(nèi)特殊途徑分化成熟；②DNT細(xì)胞經(jīng)過非胸腺途徑的內(nèi)分化途徑成熟；③DNT細(xì)胞經(jīng)過特殊環(huán)境由外周T細(xì)胞直接分化而來；④因?yàn)榭赡艽嬖诓煌瑏喰偷腄NT細(xì)胞，所以可能存在多種不同的成熟細(xì)胞通路和分化途徑。DNT細(xì)胞來源不同，其所產(chǎn)生的細(xì)胞因子亦不同。胸腺來源的DNT細(xì)胞產(chǎn)生大量的IL-10，而從血液或外周淋巴器官獲取的DNT細(xì)胞并不產(chǎn)生IL-10，而是分泌大量的IFN-γ、TNF-α和微量的TGF-β。
（2）DNT細(xì)胞具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答能力。DNT細(xì)胞不僅在自身免疫性疾病和器官移植免疫方面起著重要作用，還具有抗腫瘤作用。例如，在自身免疫性淋巴增生綜合征（ALPS）中，DNT細(xì)胞明顯增高。在ALPS的診斷標(biāo)準(zhǔn)中，其中一個必需標(biāo)準(zhǔn)是淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；蚵栽龈撸獵D3+TCRαβ+CD4-CD8- 雙陰性T細(xì)胞比例增高（≥總淋巴細(xì)胞的1.5％，或≥CD3＋淋巴細(xì)胞的2.5％）。DNT細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的病人中高于正常水平，且可產(chǎn)生IL-4和IFN-7。這些功能類似Th的DNT細(xì)胞可協(xié)助CD1c B細(xì)胞產(chǎn)生IgG。DNT細(xì)胞可通過Fas/FasL途徑、顆粒酶/穿孔素途徑和分泌細(xì)胞因子等方式來殺傷腫瘤細(xì)胞。此外，DNT細(xì)胞在體外被激活后可產(chǎn)生IL-4和IL-10，這顯示其可能具有一定的抑制性免疫調(diào)節(jié)功能。
（3）γδ T細(xì)胞是一類不同于αβ T細(xì)胞的T細(xì)胞亞群，占T淋巴細(xì)胞的1%-10%。γδ T細(xì)胞主要分布于外周血以及腸道、呼吸道、泌尿生殖道等黏膜組織和皮膚，外周血中的γδ T細(xì)胞約占人體總γδ T細(xì)胞的90%以上。γδ T細(xì)胞多為CD4-CD8-表型，但位于腸上皮內(nèi)的γδ T細(xì)胞會表達(dá)輔助受體CD8α。γδ T細(xì)胞在生物進(jìn)化上比傳統(tǒng)的αβ T細(xì)胞早出現(xiàn)，可能在生物進(jìn)化出適應(yīng)性免疫的早期就出現(xiàn)γδ T細(xì)胞了，因此γδ T細(xì)胞既保留了先天性免疫的特性，又有適應(yīng)性免疫的特性，被認(rèn)為是先天性免疫和適應(yīng)性免疫的“橋梁”。
γδ T細(xì)胞有獨(dú)特的抗原受體，識別抗原不受MHC限制，主要識別CD1分子提呈的糖脂、某些病毒的糖蛋白、分枝桿菌的磷酸糖和核苷酸衍生物等，因此γδ T細(xì)胞是一類CD1限制性T細(xì)胞。活化的γδ T細(xì)胞可通過釋放穿孔素、顆粒酶和表達(dá)FasL等方式殺傷病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，還可分泌IL-17、INF-γ和TNF-α等細(xì)胞因子來發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。早在1989年，已有報(bào)道指出γδ T細(xì)胞參與機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌( Mycobacterium tuberculosis，Mtb) 的免疫應(yīng)答，γδ T細(xì)胞被認(rèn)為在抗分枝桿菌免疫中起關(guān)鍵作用，在Mtb感染后，受到Mtb抗原刺激的γδ T細(xì)胞迅速發(fā)生活化，發(fā)揮保護(hù)性免疫的作用。
雖然γδ T細(xì)胞在外周血中數(shù)量很少，但結(jié)核桿菌低分子多肽抗原、熱休克蛋白70多肽、異戊烯焦磷酸（IPP）和帕米磷酸鈉（PAM）等均可有效地誘導(dǎo)γδ T細(xì)胞發(fā)生增殖，IL-2具有協(xié)同對γδ T細(xì)胞的促增殖作用。
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